Влияние аутологичной крови в состоянии гипоосмоса на иммунную систему организма

Биологические науки № 3, 1987

ВЛИЯНИЕ АУТОЛОГИЧНОИ КРОВИ В СОСТОЯНИИ ГИПООСМОСА НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ ОРГАНИЗМА

Р. Н. Ходанова, Л. С. Сеславина, Н. Н. Голубева, В. В. Мальцева, В. А. Зуява, О. Н. Кутькова

Проведен анализ иммунного статуса у больных нейродермитом в от­вет на лечение аутологичнои кровью. Установлено, что достигаемый тера­певтический эффект коррелирует с рядом иммунологических показателей; повышается содержание лизоцима в сыворотке крови и в слюне, увеличи­вается метаболическая активность нейтрофилов, несколько возрастает количество Т-лимфоцитов, восстанавливается баланс субпопуляций Т-лимфоцитов.

The analysis of the ummune status of patients under neurodermite after autologic blood treatment has been performed. It has been found that posi­tive therapeutic effect correlates with a number of immunologic parameters: the lysozyme content raises, the metabolic activity of neutrophilic cells increases, a number of T-lymphocytes grows to a certain degree, the balance of T-lymphocyte subpopulation normalizes.

Иммунная система играет важную роль в обеспечении гомеостаза организма. Достижения иммунологии последних лет в исследовании эндогенных биологически активных веществ, интерлейкинов и лимфокинов, вновь возродили интерес к действию на организм аутологичнои кро­ви и ее компонентов. Существенно, что в ряде случаев дополнительная обработка крови обеспечивает усиление вызываемого ею иммунокоррегирующего эффекта. Так, Е. Г. Кирдей и соавторы [2] показали, что разрушение эритроцитов и гранулоцитов способствует формированию клеточного иммунного ответа, усиливая реакцию гиперчувствительности замедленного типа и цитотоксическую активность лимфоцитов. При ис­пользовании цельной крови стимулирующий эффект достигается пред­варительным нагреванием ее до 38—40 °С [8]. Выраженное терапевти­ческое действие коррелирует с изменением иммунологических характе­ристик при ультрафиолетовом облучении собственной крови [4, 6]. Авторы предполагают, что для стимуляции иммунного ответа могут иметь значение структурно-функциональные перестройки поверхности иммунокомпетентных клеток, приводящие к обнажению рецепторов. Нельзя, видимо, также умалять роль клеточных компонентов и веществ, образующихся в результате модификации мембраны клетки и обога­щающих жидкую фракцию крови. Необходимость изучения этих явлений и механизмов очевидна.

22

Биологические науки № 3, 1987

Мы исследовали кинетику некоторых иммунологических показате­лей у пациентов, страдающих нейродермитом, в ответ на лечение их аутологичной кровью по методу Р. Н. Ходановой [7], которое предусмат­ривает внутрикожные инъекции аутокрови, находящейся в состоянии гипоосмоса. Полученные данные описаны в настоящей статье.

Были обследованы 26 человек до лечения, в процессе лечения (14-дневный курс) и спустя 1,5—2 месяца после проведенной терапии. Результаты обработаны статисти­чески.

Для оценки иммунного статуса больных проводили количественный учет Т- и В-лимфоцитов (Е-РОК и ЕАС-РОК соответственно), а также теофиллинустойчивой (ТФУ) и теофиллинчувствительной (ТФЧ) субпопуляций Т-клеток [12]. Энергетиче­ское состояние лимфоцитов оценивали цитохимическим методом Р. Н. Нарциссова [5], определяя активность митохондриальных дегидрогеназ с сукцинатом и «-глицерофос­фатом в качестве субстратов. Секреторную функцию иммунной системы определяли по содержанию в сыворотке крови иммуноглобулинов А, М, G. Кроме того, исследо­вали фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) по отношению к убитому стафи­лококку и активность окислительно-восстановительных ферментов в этих клетках в тестах с нитросиним тетразолием (НСТ) [3, 10, 11]. Под влиянием дегидрогеназной системы нейтрофила бесцветный НСТ восстанавливается в темно-фиолетовые гранулы формазана. Сравнительное изучение этой реакции в интактных клетках (спонтанный НСТ-тест) и предварительно стимулированных пирогеналом (активированный НСТ-тест) позволяет судить о потенциальных ресурсах системы фагоцитоза. В сыворотке и слюне определяли содержание лизоцима, активность которого имеет значение в им­мунологической реактивности организма [1, 9].

В результате исследования иммунологического статуса у больных нейродермитом, прошедших курс лечения описанным методом, получе­ны следующие данные (табл.). Средние величины содержания Т- и В-лимфоцитов в крови перед началом лечения в основном укладывались в норму (58±2 и 10±1 % соответственно), но имели большой диапазон колебаний внутри группы (от 40 до 78 % для Т-лимфоцитов и от 4 до 24 % Для В-лимфоцитов). В то же время количественный анализ субпо­пуляций Т-лимфоцитов выявил выраженную разницу между здоровыми и больными людьми: у больных содержание ТФУ-клеток было досто­верно более высоким. Около 70 % больных до лечения имели индекс

Динамика показателей состояния иммунитета у больных нейродермитом в процессе лечения по сравнению с нормой

Биологические науки № 3, 1987                                                                                                      23

ТФУ/ТФЧ выше 4 (в норме он равен 2), в отдельных случаях индекс ТФУ/ТФЧ составлял 7, 19 и даже 30.

Лечение приводило к некоторому возрастанию процентного содер­жания Т-лимфоцитов; его максимальное значение приходилось на конец курса, а затем наблюдалось снижение - до первоначальной величины. Действительно выраженные, "своеобразные и достоверные изменения были отмечены не в общем фонде Т-лимфоцитов, а среди их субпопуля­ций. Уже после первых дней лечения резко возрастало число ТФУ-кле-ток. После 8 суток лечения число ТФУ-клеток снижалось. В дальнейшем у всех больных прослеживалась тенденция к нормализации клеточного баланса исследованных субпопуляций. В результате лечения (спустя 1,5—2 месяца) содержание Т-лимфоцитов (в %) у больных было не­сколько выше, чем исходное, но абсолютное число Т-лимфоцитов не ме­нялось. Колебания числа В-лимфоцитов не имели закономерного харак­тера на протяжении всего периода наблюдения. Вместе с тем станови­лось практически нормальным соотношение субпопуляций Т-лимфоци­тов (ТФУ/ТФЧ = 2,4), что явилось следствием сокращения пределов колебания числа ТФУ-клеток внутри обследованной группы: до лечения диапазон колебаний составлял 12—76%, после проведенного курса — 27—52 % -

При исследовании митохондриальных дегидрогеназ установлено, что у 60 % больных до лечения уровень активности сукцинатдегидроге-назы (СДГ) и а-глицерофосфатдегидрогеназы (а-ГФДГ) отвечал нор­мальным показателям, а соотношение активностей этих ферментов соот­ветствовало норме у 40 % больных.

Примененное терапевтическое воздействие уже на 1—7-е сутки вы­зывало значительное снижение суммарной активности а-ГФДГ в лимфо­цитах, что влекло за собой дисбаланс соотношения активностей изучен­ных ферментов. В этот период нормальные показатели а-ГФДГ и физио­логический баланс ферментов не были выявлены ни у одного больного. Отметим, что в эти же сроки среди лимфоцитов появилась большая по­пуляция клеток, не активных в отношении а-ГФДГ (т. е. с крайне низ­ким количеством гранул формазана), число которых к 10—14-м суткам по сравнению с нормой возросло с 9 до 25%. Спустя 1,5—2 месяца после проведенного курса лечения количественные характеристики изу­ченных ферментов приближались к нормальным.

Из представленных данных следует, что примененное лечение ока­зывает значительное и быстрое влияние на обменные процессы в лим­фоцитах. Аутологичная кровь в состоянии гипоосмоса, по-видимому, воздействует не только на активность ферментов. Принимая во внима­ние распределение популяции лимфоцитов по уровню а-ГФДГ в началь­ные сроки лечения (имеется в виду появление большого количества «не­активных» клеток), можно полагать, что она стимулирует выброс в кро­вяное русло клеток с иной метаболической характеристикой.

Об уровне секреторной функции иммунокомпетентных клеток суди­ли по концентрации в сыворотке больных иммуноглобулинов А, М, G. До начала лечения этот показатель находился в пределах нормы, одна­ко у большинства пациентов (77, 77 и 74 % для иммуноглобулинов А, М и G соответственно) располагался в интервале между средней вели­чиной нормы и нижней ее границей. Проведенное лечение выраженного изменения этого иммунологического показателя не вызвало. Выявлена лишь некоторая тенденция к уменьшению концентрации иммуноглобу­линов: возросло число больных с заметно заниженными и уменьши­лось— с повышенными значениями; колебания уровня от средней вели­чины до нижней ее границы стали составлять 100, 100 и 85 % для имму­ноглобулинов А, М и G соответственно. Однако достоверными эти изме­нения оказались только для иммуноглобулина А. 

В ходе исследования получены также данные, характеризующие ре­акцию неспецифического иммунитета организма. Оказалось, что число

24                                                                                                    Биологические науки № 3, 1987

фагоцитирующих нейтррфилов не отражает существа перестроек, про­исходящих в организме под действием лечения (процентное количество этих клеток у больных соответствовало таковому у здоровых и в про­цессе лечения не менялось). В то же время наглядными были тесты,, характеризующие метаболическую активность нейтрофилов, поскольку они указывали на нормализацию функционального состояния клеток. Так, несмотря на то что спонтанный НСТ-тест постоянно выявляет у больных нейродермитом повышенное «напряжение» клетки (26±5 при норме 12±2), возрастание разницы между спонтанным и активирован­ным тестами НСТ (10±2 и 19±3) говорит от увеличении потенциальных возможностей микробоцидной системы нейтрофилов. Убедительным от­ражением положительных изменений в функции нейтрофилов и моно­цитов в ответ на проведенное лечение служат также данные об измене­ниях содержания лизоцима в сыворотке и особенно в слюне.

Описанные результаты свидетельствуют о чрезвычайно быстрой реакции иммунной системы организма на примененное воздействие аутологичной кровью. Особенно наглядны в этом отношении цитохимические исследования, которые выявили быструю перестройку метаболизма лим­фоцитов и нейтрофилов, а также данные о динамике субпопуляций Т-лимфоцитов. Достигаемый терапевтический эффект коррелировал с рядом иммунологических показателей, отражающих благоприятное дей­ствие примененного метода лечения нейродермита: повышалась кон­центрация лизоцима, увеличивалась активность нейтрофилов в сравни­тельном НСТ-тесте, несколько возрастало количество Т-лимфоцитов,. восстанавливался баланс субпопуляций Т-лимфоцитов. Вместе с тем у всех больных на протяжении первой недели лечения были отмечены и не имеющие пока убедительного объяснения парадоксальные изменения,, которые заключаются в появлении большого числа «неактивных» по а-ГФДГ Лимфоцитов и резком возрастании численности ТФУ-лимфоци-тов, что приводило к еще более выраженному дисбалансу субпопуляций. Известно, что теофиллин оказывает на мембраны Т-лимфоцитов двоякое действие — на части зрелых клеток он маскирует рецепторы к эритроци­там барана, а на незрелых Т-лимфоцитах он может вызывать их экс­прессию. Это позволяет предполагать гетерогенность ТФУ-субпопуляции в случае резкого возрастания ее числа в первые дни лечения больных. Есть основание считать, что дополнительной к исходной популяции ТФУ-клеток на 4—8-е сутки лечения могут быть мигрирующие в кровя­ное русло незрелые лимфоциты, относящиеся, по-видимому, к субпопу­ляции предшественников Т-клеток. Выяснение путей индукции этих кле­ток, их дифференцировки и осуществления эффекторного действия — один из существенных моментов в изучении механизмов терапевтиче­ского действия примененного метода лечения.

Таким образом, при обследовании больных нейродермитом, ле­ченных по методу Р. Н. Ходановой аутологичной кровью в условиях гипоосмоса, обнаружена быстрая и глубокая реакция различных звень­ев иммунной системы организма. Как показал анализ, выявленные ре­акции имеют иммунокоррегирующую направленность.

Литература

1.       Бухарин О. В., Васильев   Н. В. Лизоцим и его роль в биологии и меди­
цине. Томск, 1974.

2.       Кирдей  Е.  Г.,  Нечаева  В.  И,  и  др.  Влияние  разрушенных  эритроцитов  и
гранулоцитов   на   формирование   клеточного   иммунного   ответа.   —  Иммунология,
1985, № з, с. 76—78.

3.       Климов В. В., К-ошовкина   Т.  В.  Тест восстановления нитросинего тетра-
золия, стимулированного пирогеналом. — Лабораторное дело, 1982, № 10, с. 624—
626.

4.       К р ы л е н к о в В. А., Кукуй Л. М. и др. Облученная ультрафиолетовым све­
том   кровь:   фотохимия,   иммунологическое  действие.  —  Докл.  АН  СССР,   1983_V
т. 270, № 1, с. 242—246.                               ’