Москва, ул. Давыдковская 6,
м. Славянский бульвар

Звоните, мы работаем
Пн - Пт 8:00-19:30 Сб 9:00-13:00 

+7(499)445-40-83
Мой статус - звонок по Skype


Обычный просмотр

Влияние аутологичной крови в состоянии гипоосмоса на иммунную систему организма

Биологические науки № 3, 1987

ВЛИЯНИЕ АУТОЛОГИЧНОИ КРОВИ В СОСТОЯНИИ ГИПООСМОСА НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ ОРГАНИЗМА

Р. Н. Ходанова, Л. С. Сеславина, Н. Н. Голубева, В. В. Мальцева, В. А. Зуява, О. Н. Кутькова

Проведен анализ иммунного статуса у больных нейродермитом в от­вет на лечение аутологичнои кровью. Установлено, что достигаемый тера­певтический эффект коррелирует с рядом иммунологических показателей; повышается содержание лизоцима в сыворотке крови и в слюне, увеличи­вается метаболическая активность нейтрофилов, несколько возрастает количество Т-лимфоцитов, восстанавливается баланс субпопуляций Т-лимфоцитов.

The analysis of the ummune status of patients under neurodermite after autologic blood treatment has been performed. It has been found that posi­tive therapeutic effect correlates with a number of immunologic parameters: the lysozyme content raises, the metabolic activity of neutrophilic cells increases, a number of T-lymphocytes grows to a certain degree, the balance of T-lymphocyte subpopulation normalizes.

Иммунная система играет важную роль в обеспечении гомеостаза организма. Достижения иммунологии последних лет в исследовании эндогенных биологически активных веществ, интерлейкинов и лимфокинов, вновь возродили интерес к действию на организм аутологичнои кро­ви и ее компонентов. Существенно, что в ряде случаев дополнительная обработка крови обеспечивает усиление вызываемого ею иммунокоррегирующего эффекта. Так, Е. Г. Кирдей и соавторы [2] показали, что разрушение эритроцитов и гранулоцитов способствует формированию клеточного иммунного ответа, усиливая реакцию гиперчувствительности замедленного типа и цитотоксическую активность лимфоцитов. При ис­пользовании цельной крови стимулирующий эффект достигается пред­варительным нагреванием ее до 38—40 °С [8]. Выраженное терапевти­ческое действие коррелирует с изменением иммунологических характе­ристик при ультрафиолетовом облучении собственной крови [4, 6]. Авторы предполагают, что для стимуляции иммунного ответа могут иметь значение структурно-функциональные перестройки поверхности иммунокомпетентных клеток, приводящие к обнажению рецепторов. Нельзя, видимо, также умалять роль клеточных компонентов и веществ, образующихся в результате модификации мембраны клетки и обога­щающих жидкую фракцию крови. Необходимость изучения этих явлений и механизмов очевидна.


22


Биологические науки № 3, 1987


 


Мы исследовали кинетику некоторых иммунологических показате­лей у пациентов, страдающих нейродермитом, в ответ на лечение их аутологичной кровью по методу Р. Н. Ходановой [7], которое предусмат­ривает внутрикожные инъекции аутокрови, находящейся в состоянии гипоосмоса. Полученные данные описаны в настоящей статье.

Были обследованы 26 человек до лечения, в процессе лечения (14-дневный курс) и спустя 1,5—2 месяца после проведенной терапии. Результаты обработаны статисти­чески.

Для оценки иммунного статуса больных проводили количественный учет Т- и В-лимфоцитов (Е-РОК и ЕАС-РОК соответственно), а также теофиллинустойчивой (ТФУ) и теофиллинчувствительной (ТФЧ) субпопуляций Т-клеток [12]. Энергетиче­ское состояние лимфоцитов оценивали цитохимическим методом Р. Н. Нарциссова [5], определяя активность митохондриальных дегидрогеназ с сукцинатом и «-глицерофос­фатом в качестве субстратов. Секреторную функцию иммунной системы определяли по содержанию в сыворотке крови иммуноглобулинов А, М, G. Кроме того, исследо­вали фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) по отношению к убитому стафи­лококку и активность окислительно-восстановительных ферментов в этих клетках в тестах с нитросиним тетразолием (НСТ) [3, 10, 11]. Под влиянием дегидрогеназной системы нейтрофила бесцветный НСТ восстанавливается в темно-фиолетовые гранулы формазана. Сравнительное изучение этой реакции в интактных клетках (спонтанный НСТ-тест) и предварительно стимулированных пирогеналом (активированный НСТ-тест) позволяет судить о потенциальных ресурсах системы фагоцитоза. В сыворотке и слюне определяли содержание лизоцима, активность которого имеет значение в им­мунологической реактивности организма [1, 9].

В результате исследования иммунологического статуса у больных нейродермитом, прошедших курс лечения описанным методом, получе­ны следующие данные (табл.). Средние величины содержания Т- и В-лимфоцитов в крови перед началом лечения в основном укладывались в норму (58±2 и 10±1 % соответственно), но имели большой диапазон колебаний внутри группы (от 40 до 78 % для Т-лимфоцитов и от 4 до 24 % Для В-лимфоцитов). В то же время количественный анализ субпо­пуляций Т-лимфоцитов выявил выраженную разницу между здоровыми и больными людьми: у больных содержание ТФУ-клеток было досто­верно более высоким. Около 70 % больных до лечения имели индекс

Динамика показателей состояния иммунитета у больных нейродермитом в процессе лечения по сравнению с нормой

 

Показатели                       ,

До лечения

В процессе лечения

Через 2 месяца после лечения

В норме

Число лейкоцитов, тыс. кл/мм3

6,0±0,4

5,0±0,4

5,6±0,9

6,2+0,6

Количество лимфоцитов, %

34±2

33±4

34±2

33,0+0,3

Е-РОК

 

 

 

 

%

58±2

64±3

59±2

66+2

абс.

1,1±0,2

1,2±0,2

1,0±0,1

 

ЕАС-РОК

 

 

 

 

%

10±1

12±0,5

П,1±0,6

13±1

абс.

0,2±0,1

0,2±0

0,1±0

 

ТФУ, %

44±3

56±5

43±2

 

ТФЧ, %

13,7

5,8

18±2

 

ТФУ/ТФЧ

3,2

9,8

2,4

2

Концентрация   иммуноглобулинов

 

 

 

 

в сыворотке

 

 

 

 

А

2,2±0,3

1,3±0,1

1,5±0,1

2,8±0,7

М

1,0±0,1

1,0±0,2

0,8±0,1

1,0±0,1

G

П,5±0,8

П,8±2,0

Ю,0±0,6

12,4±2,2

ФАН, %

42±5

44±8

40±4

41±2

НСТ-тест

 

 

 

 

спонтанный

25±5

 

23±9

12±2

активированный

35±4

 

42±9

зо±з

Концентрация лизоцима, г/л в сыворотке крови в слюне

9±2 81±18

17±6 140±32

8±2 127±14

9±1 122±15


Биологические науки № 3, 1987                                                                                                      23

ТФУ/ТФЧ выше 4 (в норме он равен 2), в отдельных случаях индекс ТФУ/ТФЧ составлял 7, 19 и даже 30.

Лечение приводило к некоторому возрастанию процентного содер­жания Т-лимфоцитов; его максимальное значение приходилось на конец курса, а затем наблюдалось снижение - до первоначальной величины. Действительно выраженные, "своеобразные и достоверные изменения были отмечены не в общем фонде Т-лимфоцитов, а среди их субпопуля­ций. Уже после первых дней лечения резко возрастало число ТФУ-кле-ток. После 8 суток лечения число ТФУ-клеток снижалось. В дальнейшем у всех больных прослеживалась тенденция к нормализации клеточного баланса исследованных субпопуляций. В результате лечения (спустя 1,5—2 месяца) содержание Т-лимфоцитов (в %) у больных было не­сколько выше, чем исходное, но абсолютное число Т-лимфоцитов не ме­нялось. Колебания числа В-лимфоцитов не имели закономерного харак­тера на протяжении всего периода наблюдения. Вместе с тем станови­лось практически нормальным соотношение субпопуляций Т-лимфоци­тов (ТФУ/ТФЧ = 2,4), что явилось следствием сокращения пределов колебания числа ТФУ-клеток внутри обследованной группы: до лечения диапазон колебаний составлял 12—76%, после проведенного курса — 27—52 % -

При исследовании митохондриальных дегидрогеназ установлено, что у 60 % больных до лечения уровень активности сукцинатдегидроге-назы (СДГ) и а-глицерофосфатдегидрогеназы (а-ГФДГ) отвечал нор­мальным показателям, а соотношение активностей этих ферментов соот­ветствовало норме у 40 % больных.

Примененное терапевтическое воздействие уже на 1—7-е сутки вы­зывало значительное снижение суммарной активности а-ГФДГ в лимфо­цитах, что влекло за собой дисбаланс соотношения активностей изучен­ных ферментов. В этот период нормальные показатели а-ГФДГ и физио­логический баланс ферментов не были выявлены ни у одного больного. Отметим, что в эти же сроки среди лимфоцитов появилась большая по­пуляция клеток, не активных в отношении а-ГФДГ (т. е. с крайне низ­ким количеством гранул формазана), число которых к 10—14-м суткам по сравнению с нормой возросло с 9 до 25%. Спустя 1,5—2 месяца после проведенного курса лечения количественные характеристики изу­ченных ферментов приближались к нормальным.

Из представленных данных следует, что примененное лечение ока­зывает значительное и быстрое влияние на обменные процессы в лим­фоцитах. Аутологичная кровь в состоянии гипоосмоса, по-видимому, воздействует не только на активность ферментов. Принимая во внима­ние распределение популяции лимфоцитов по уровню а-ГФДГ в началь­ные сроки лечения (имеется в виду появление большого количества «не­активных» клеток), можно полагать, что она стимулирует выброс в кро­вяное русло клеток с иной метаболической характеристикой.

Об уровне секреторной функции иммунокомпетентных клеток суди­ли по концентрации в сыворотке больных иммуноглобулинов А, М, G. До начала лечения этот показатель находился в пределах нормы, одна­ко у большинства пациентов (77, 77 и 74 % для иммуноглобулинов А, М и G соответственно) располагался в интервале между средней вели­чиной нормы и нижней ее границей. Проведенное лечение выраженного изменения этого иммунологического показателя не вызвало. Выявлена лишь некоторая тенденция к уменьшению концентрации иммуноглобу­линов: возросло число больных с заметно заниженными и уменьши­лось— с повышенными значениями; колебания уровня от средней вели­чины до нижней ее границы стали составлять 100, 100 и 85 % для имму­ноглобулинов А, М и G соответственно. Однако достоверными эти изме­нения оказались только для иммуноглобулина А.

В ходе исследования получены также данные, характеризующие ре­акцию неспецифического иммунитета организма. Оказалось, что число


24                                                                                                    Биологические науки № 3, 1987

фагоцитирующих нейтррфилов не отражает существа перестроек, про­исходящих в организме под действием лечения (процентное количество этих клеток у больных соответствовало таковому у здоровых и в про­цессе лечения не менялось). В то же время наглядными были тесты,, характеризующие метаболическую активность нейтрофилов, поскольку они указывали на нормализацию функционального состояния клеток. Так, несмотря на то что спонтанный НСТ-тест постоянно выявляет у больных нейродермитом повышенное «напряжение» клетки (26±5 при норме 12±2), возрастание разницы между спонтанным и активирован­ным тестами НСТ (10±2 и 19±3) говорит от увеличении потенциальных возможностей микробоцидной системы нейтрофилов. Убедительным от­ражением положительных изменений в функции нейтрофилов и моно­цитов в ответ на проведенное лечение служат также данные об измене­ниях содержания лизоцима в сыворотке и особенно в слюне.

Описанные результаты свидетельствуют о чрезвычайно быстрой реакции иммунной системы организма на примененное воздействие аутологичной кровью. Особенно наглядны в этом отношении цитохимические исследования, которые выявили быструю перестройку метаболизма лим­фоцитов и нейтрофилов, а также данные о динамике субпопуляций Т-лимфоцитов. Достигаемый терапевтический эффект коррелировал с рядом иммунологических показателей, отражающих благоприятное дей­ствие примененного метода лечения нейродермита: повышалась кон­центрация лизоцима, увеличивалась активность нейтрофилов в сравни­тельном НСТ-тесте, несколько возрастало количество Т-лимфоцитов,. восстанавливался баланс субпопуляций Т-лимфоцитов. Вместе с тем у всех больных на протяжении первой недели лечения были отмечены и не имеющие пока убедительного объяснения парадоксальные изменения,, которые заключаются в появлении большого числа «неактивных» по а-ГФДГ Лимфоцитов и резком возрастании численности ТФУ-лимфоци-тов, что приводило к еще более выраженному дисбалансу субпопуляций. Известно, что теофиллин оказывает на мембраны Т-лимфоцитов двоякое действие — на части зрелых клеток он маскирует рецепторы к эритроци­там барана, а на незрелых Т-лимфоцитах он может вызывать их экс­прессию. Это позволяет предполагать гетерогенность ТФУ-субпопуляции в случае резкого возрастания ее числа в первые дни лечения больных. Есть основание считать, что дополнительной к исходной популяции ТФУ-клеток на 4—8-е сутки лечения могут быть мигрирующие в кровя­ное русло незрелые лимфоциты, относящиеся, по-видимому, к субпопу­ляции предшественников Т-клеток. Выяснение путей индукции этих кле­ток, их дифференцировки и осуществления эффекторного действия — один из существенных моментов в изучении механизмов терапевтиче­ского действия примененного метода лечения.

Таким образом, при обследовании больных нейродермитом, ле­ченных по методу Р. Н. Ходановой аутологичной кровью в условиях гипоосмоса, обнаружена быстрая и глубокая реакция различных звень­ев иммунной системы организма. Как показал анализ, выявленные ре­акции имеют иммунокоррегирующую направленность.

Литература

1.       Бухарин О. В., Васильев   Н. В. Лизоцим и его роль в биологии и меди­
цине. Томск, 1974.

2.       Кирдей  Е.  Г.,  Нечаева  В.  И,  и  др.  Влияние  разрушенных  эритроцитов  и
гранулоцитов   на   формирование   клеточного   иммунного   ответа.     Иммунология,
1985, № з, с. 76—78.

3.       Климов В. В., К-ошовкина   Т.  В.  Тест восстановления нитросинего тетра-
золия, стимулированного пирогеналом. — Лабораторное дело, 1982, № 10, с. 624—
626.

4.       К р ы л е н к о в В. А., Кукуй Л. М. и др. Облученная ультрафиолетовым све­
том   кровь:   фотохимия,   иммунологическое  действие.    Докл.  АН  СССР,  
1983V
т. 270, № 1, с. 242—246.                               '


Биологические науки № 3, 1987                                                                                                   25

5. Н а р ц и с с о в Р. Н. Применение н-нитротетразоляя фиолетового для количест­венной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека. — Арх. патологии, 1969, № 5, с. 85—88.

"6. П о т а ш о в Л. В., Ч е м и н а в а Р. В. Ультрафиолетовое облучение собственной крови. — Вестн. хирургии, 1982, № 6, с. 130—134.

7.       X о д а н о в а  Р.  Н.  Способ лечения  аллергических  заболеваний.  Авт.  свидетель­
ство СССР № 741877. — Бюл. изобрет., 1980, № 23.

8.   Ш ахтм ейстер И. Я., Зудин Б. И. и др. Способ повышения иммунологиче­
ской     реактивности    организма     (его    варианты).     Авт.     свидетельство    СССР
№ 923550'. — Бюл. изобрет., 1982, № 16,

9.   Barling P. M. et al. The isolation and characterization of lysozyme from human
fortal membranes comparison with the enzyme from other sources. — Сотр.
Bioc-
hem. a. Physiol., 1985, B. 81. № 2, p. 509—511.

 

10.        Lace J. K. et al. An appraisal of the nitroblue tetrazolium reduction test. Amer.
Journ. Med., 1975, v. 58, p. 685—696.

11.        Park В. Н. The use and limitations of the nitroblue tetrazolium test as a diagnos­
tic acid. Journ. Pediatr., 1971, v. 78, p. 376—378.

12.        Shore A., et. al. Induction and separation of antigendependent T-helper and T-sup-
ressor cells in men. Nature (London), 1978, v. 274, p. 586—587.

Рекомендована Институтом иммунологии Министерства здравоохранения СССР. Поступила 19 ноября 1986 г.

Запись на прием

Заполните все обязательные поля, пожалуйста



Мы в FB Мы в VK  Мы в OK

Распечатать купон
подробнее о скидке

Задать вопрос доктору

Напишите нам свой вопрос и наши специалисты на него обязательно Вам ответят.


Напишите нам свой вопрос и наши специалисты на него обязательно Вам ответят.




Обратная связь:



immun.ru © 2003 - 2017 Все права защищены. Для связи: mail@immun.ru
Медицинский центр иммунокоррекции им. Р.Н. Ходановой. ООО "ВИТЕЛА"
Лицензия на медицинскую деятельность № ЛО-77-01-010176 от 29 апреля 2015г. бессрочная.
16+ Материал сайта не предназначены для детей младше 16 лет.